小鼠瘦素檢測試劑盒的操作流程是什么

發(fā)布時間： 2022-07-07　　點擊次數(shù)： 734次

　　小鼠瘦素檢測試劑盒是用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗該指標抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗該指標抗體、HRP標記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，計算樣品濃度。

　　小鼠瘦素檢測試劑盒的操作流程：

　　(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。

　　(2)酶標板置4℃，包被過夜。

　　(3)洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后，即甩去)，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。

　　(4)陰性對照孔每孔加入PBS50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。

　　(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

　　(6)洗板，同(4)。

　　(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液100μl。

　　(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

　　(9)洗板，同(4)。

　　(10)每孔加TMB顯色液100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。

　　(11)每孔加100μl2mol/LH2SO4終止反應(yīng)。